油脂中磷脂測(cè)定法（GB5537—85）

油脂中磷脂即由甘油、脂肪酸、磷酸和氨基醇等所組成的復(fù)雜化合物。

（一）鉬藍(lán)比色法

1．儀器和用具

瓷坩堝或石英坩堝；分光光度計(jì)或帶塞的50ml比色管；移液管：5、10ml；電爐、高溫爐；溶量瓶：100、500、1000ml；表面皿、燒杯、量筒；恒溫水浴鍋；漏斗、坩堝鉗、試劑瓶等。

2、試劑

50%氫氧化鉀溶液；鹽酸、硫酸、氧化鋅、濾紙；0.015%硫酸聯(lián)氨溶液；

2.5%鉬酸鈉稀硫酸溶液：量取140ml硫酸注入300ml水中 ，搖勻，冷卻至室溫，加入12.5g鉬酸鈉，溶解后加入水至500ml，搖勻，靜置24h備用。

磷標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱(chēng)取無(wú)水的磷酸二氫鉀0.4391g溶于1000ml水中，作為1號(hào)液，含磷0.1mg/ml,吸取1號(hào)液10ml，加水稀釋至100ml,含磷0.01mg/ml,作為2號(hào)液，比色用。

3．操作方法

（1）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：取5只50ml比色管，編成1，2，4，6，8五個(gè)號(hào)碼，按號(hào)碼順序分別注入磷標(biāo)準(zhǔn)2號(hào)液1，2，4，6，8ml，再按順序分別加水 9、8、6、4、2ml。 接著向5只管內(nèi)各加0.015%硫酸聯(lián)氨溶液8.0ml；各加鉬酸鈉稀硫酸溶液2.0ml，加塞、搖勻。去塞，將5只管置于正在沸騰的水浴中加熱 10min，取出冷卻至室溫，用水稀釋至50ml，充分搖勻，經(jīng)10min后，用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)650nm下，用3cm液槽，用水調(diào)整零點(diǎn)，分別測(cè)定消 化值。以消化值為縱坐標(biāo)，以磷量（0.01、0.02、0.04、0.06、0.08mg）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（2）制備被測(cè)液：用坩堝稱(chēng)取試樣約10g(準(zhǔn)確至0.001g),加氧化鋅0.5g,先在電爐上加熱炭化，然后送入550～600℃的高溫爐中灼燒至灰 化（白色），灼燒時(shí)間約2h,取出坩堝冷卻至室溫，用熱鹽酸（1：1）10ml溶結(jié)灰分，并加熱微沸5min，將溶解液過(guò)濾注入100ml容量瓶中，用熱 水沖洗坩堝和濾紙，待濾液冷卻至室溫后，用50%氫氧化鉀溶液中和至出現(xiàn)混濁，緩慢滴加鹽酸使氧化鋅沉淀全部溶解后，再滴2滴，后用水稀釋至刻度，搖 勻。

（3）比色：用移液管吸取被測(cè)液10ml注入50ml比色管中，加入0.015%硫酸聯(lián)氨8.0ml，加2.0ml鉬酸鈉稀硫酸溶液、加塞，將比色管置于 正在沸騰的水浴中加熱10min，取出冷卻至室溫，用水稀釋至50ml，充分搖勻，經(jīng)10min后，用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)650nm下，用3cm液槽，用水 調(diào)整零點(diǎn)，測(cè)定消光值。

4.結(jié)果計(jì)算

根據(jù)被測(cè)液的消光值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得磷量（P）,按公式3—33計(jì)算磷脂含量：

磷脂（%）=p×V2 / V1 ×26.31×100 / W×1000 (3—33)

式中：P—標(biāo)準(zhǔn)曲線差得的磷量，mg; v2—樣品灰化后稀釋的體積，ml；

V1—比色時(shí)所取的被測(cè)液體積，ml；26.31—每毫克磷相當(dāng)于磷脂的毫克數(shù)；W—試樣重量，g。

雙試驗(yàn)結(jié)果允許差不超過(guò)0.04%，求其平均數(shù)，即為測(cè)定結(jié)果。測(cè)定結(jié)果取小數(shù)點(diǎn)后二位。

（二） 重量法

1.儀器和用具

玻璃漏斗、漏斗架；燒杯：100ml; 錐形平、濾紙等。

2.試劑

丙酮

3.操作方法

取混勻的樣品約100ml,加熱約90℃時(shí)進(jìn)行過(guò)濾。用燒杯稱(chēng)取試樣25g，加熱至80℃，加水2～2.5ml，充分?jǐn)嚢枋怪?，在室溫下靜置過(guò)夜，或 進(jìn)行離心沉淀，傾出上層清液，用已知恒重的濾紙（或用抽裝置抽濾）進(jìn)行過(guò)濾，待濾液全部濾出后，用冷的丙酮把杯內(nèi)殘留的沉淀沖洗入濾紙中，繼續(xù)用水調(diào)整零 點(diǎn)，測(cè)定消光值。

4.結(jié)果計(jì)算

重量法測(cè)定磷脂含量按公式3—34計(jì)算：

磷脂（%）=W1 / W ×100 式中：W1—沉淀物重，g；W—試樣重量，g。

雙試驗(yàn)結(jié)果允許差不超過(guò)0.04%，求其平均數(shù)，即為測(cè)定結(jié)果。測(cè)定結(jié)果取小數(shù)點(diǎn)后二位。

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